杂交瘤测序是对通过杂交瘤技术产生的细胞进行基因测序的过程，用于研究杂交瘤细胞的基因组信息。杂交瘤细胞是在实验室中通过细胞融合技术，将具备特定抗体产生能力的B细胞与不朽化的骨髓瘤细胞融合而成的细胞。通过这种方法，研究人员能够创建出既具有抗体分泌能力，又可以无限增殖的细胞系。杂交瘤技术用于制备单克隆抗体，将能产生抗体的 B 淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，形成的杂交瘤细胞既具有 B 淋巴细胞产生特异性抗体的能力，又具有骨髓瘤细胞在体外无限增殖的特性。杂交瘤测序就是为了深入分析这些细胞的基因组，为科学家们提供更加详尽的遗传信息。在单克隆抗体药物的研发中，杂交瘤测序是必不可少的环节。通过测序确定的抗体序列可以用于优化抗体的亲和力、稳定性和药效等性能，从而开发出更有效的治疗药物。例如在癌症治疗中使用的单克隆抗体药物，通过杂交瘤测序不断改进抗体的靶向性和治疗效果。杂交瘤测序的作用不可低估。杂交瘤测序可以帮助研究人员了解杂交瘤细胞的基因组结构，揭示影响抗体产生的基因调控机制，并寻找可能导致杂交瘤不稳定的遗传因素。此外，通过杂交瘤测序，科学家可以识别出抗体基因的独特序列特征，为优化抗体生产提供指导。

一、测序流程

1、DNA 提取

从杂交瘤细胞中提取基因组 DNA 或者 mRNA。如果提取 mRNA，还需要通过逆转录酶将其反转录为 cDNA。mRNA 提取的优势在于可以直接获取编码抗体的基因信息，因为它去除了内含子等非编码序列，更方便后续的测序分析。

2、引物设计

根据抗体基因的已知序列特征设计引物。对于抗体的重链和轻链可变区，通常有保守的序列框架可以作为引物设计的靶点。引物的质量直接影响测序的准确性和完整性。

3、PCR 扩增

使用设计好的引物对目标抗体基因片段进行聚合酶链式反应（PCR）扩增。这一步可以增加目标基因片段的数量，使其达到可以进行测序分析的量。PCR 过程中需要严格控制反应条件，如温度、时间和酶的活性等，以确保扩增的特异性和效率。

4、测序技术选择

（1）Sanger 测序：具有测序长度长、准确性高的优点，适合对单个或少数几个杂交瘤细胞产生的抗体基因进行测序。但是其通量较低，对于大规模的测序项目效率不高。

（2）二代测序（NGS）：如 Illumina 测序技术，可以同时对多个样本或者大量的 DNA 片段进行测序，能够高通量地获取杂交瘤细胞的抗体基因序列信息。不过其测序读长相对较短，在数据分析时可能需要更多的拼接等处理步骤。

5、数据分析

对测序得到的数据进行分析，包括序列拼接、比对和注释等。通过与已知的抗体基因数据库进行比对，可以确定所测抗体基因的类型、家族以及其独特的可变区序列特征。还可以分析序列的突变情况、潜在的糖基化位点等影响抗体功能的因素。

二、杂交瘤测序的目的

1、抗体基因鉴定

确定所产生抗体的基因序列。通过测序，可以明确抗体的重链和轻链的可变区序列，这些区域决定了抗体的抗原结合特异性。

2、质量控制

在单克隆抗体的研发和生产过程中，对杂交瘤细胞进行测序可以保证抗体的一致性和稳定性。比如在不同批次的抗体生产中，通过比对测序结果，确保产生的抗体在基因水平上没有发生变化。

3、新抗体发现

通过对杂交瘤细胞的测序，有可能发现具有新的抗原结合特性的抗体，为药物研发、疾病诊断等领域提供新的工具。

杂交瘤测序的一大优势是其高灵敏度和高分辨率。相比于传统的基因分析方法，杂交瘤测序能够精确定位基因组中的突变位点，识别复杂的基因重排和拷贝数变异。百泰派克生物科技一直专注于杂交瘤测序分析服务，我们拥有经验丰富的科研团队，能够为客户提供从样品制备、杂交瘤测序分析到数据处理的一站式服务。我们提供的杂交瘤测序服务，依托先进的测序平台和精湛的生物信息分析能力，能够为客户提供全面精准的基因组解析。如您对杂交瘤测序有任何需求或疑问，欢迎随时与我们联系，我们的专家团队将竭诚为您服务。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

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